实验原理:荧光素在荧光素酶、ATP等物质参与下,进行反应发出荧光;用分光光度计可测定发光强度;当荧光素和荧光素酶都足量时,在一定范围内,ATP的含量与发光强度成正比
实验步骤:
(一)ATP的提取:称取一定量的人参愈伤组织,研磨后沸水浴10min,冷却至室温,离心,取上清液
(二)ATP的测定:吸取一定量的上清液,放入分光光度计反应室内,并注入适量的所需物质,在有氧等适宜条件下进行反应,记录发光强度并计算ATP含量
请回答:
①学习小组配制了1×10-8mol/L ATP标准液、70mg/L荧光素溶液(过量)和溶液进行实验
②结果表明:图中点所对应的荧光素酶浓度为最佳浓度e、f、g点所对应的荧光素酶浓度不同,但发光强度相同,这是因为
(一)比色杯(容器)中分别加入浓度为1 x 10-7 M、1 x 10-8 M、1 x 10-9 M、l x 10-10 M、1 x 10-11M的ATP溶液0.2mL,向各比色杯中加入0.8mL荧光素酶系溶液,混匀后立即用分光光度计测量各比色杯发光强度,实验设定的温度为25℃,pH为7.4—7.8。以坐标图形式绘出ATP浓度与发光强度关系曲线。
(二)将未萌发、萌发12小时、萌发24小时的玉米胚10粒,70℃高温处理后,经研磨、提取,获得组织样液。利用荧光素酶系溶液测定荧光强度,从(1)所绘出的曲线中查出相应ATP浓度值。回答下列问题:
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① |
② |
③ |
1组 |
0.2mol |
0.8mol |
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2组 |
0.2mol |
0.8mol |
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3组 |
0.2mol |
0.8mol |
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