1. (2019·广东模拟) 人参是珍贵的药用植物，研究人员运用转基因技术构建乙肝病毒表面抗原( HBsAg)的人参细胞表达系统，为珍贵药用植物与疫苗联合应用开辟了新思路，其构建过程如图所示，图中SmaⅠ、SstⅠ、 EcoRV为限制酶。请回答相关问题：

1. （1） ②的构建过程除限制酶外还需要酶；想要从②中重新获得 HBSAg基因，所用的限制酶不能是EcoRⅤ或SmaⅠ，原因是。
3. （2） 将重组质粒转入农杆菌常用处理細胞：要使目的基因成功整合到人参细胞的染色体上，该过程所采用的质粒应含有。
5. （3） 分析图可知，②中应含有的标记基因是；过程⑤的目的是。
7. （4） 研究人员将 HBsAg基因表达蛋白上的某位点氨基酸进行替换，通过一定的方法获得了新 HBsAg基因，进而获得了免疫效应更强的疫苗，请按照蛋白质工程的原理写出获得新 HBsAg基因的基本途径。