(一)实验原理
1．分离的依据：微生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上，样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。
2．纯化的依据：将单个菌落接种到斜面培养基上，经培养后，即可得到一个微生物的纯种。
(二)方法步骤
1．微生物的分离
(1)稀释：用1mL无菌吸管吸取1mL大肠杆菌培养液，加入到盛有9mL无菌水的大试管中，充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1mL加入另一支盛有9mL无菌水的试管中，混合均匀，依次类推制成10^－1、10^－2、10^－3、10^－4、10^－5、10^－6系列稀释度的大肠杆菌稀释液。
(2)划线或涂布
①平板划线分离法：在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取大肠杆菌培养液一环在平板上划线，常用的划线方法有平行划线和连续划线两种。划线完毕后，盖上培养皿盖，做好标记。
②涂布分离法：取3个平板，底面分别用记号笔写上10^－4、10^－5、10^－6三种稀释度，然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各0.1mL，放入已标记好的平板上，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5-10min，使菌液吸附进培养基。
(3)培养：将划线或涂布接种的平板倒置于培养箱或温室中37℃培养16-24h，即可长出单个菌落。
2．接斜面
分别从培养后长出的单个菌落上挑取少许细胞，接种到斜面培养基上，置培养箱或温室37℃培养24h，斜面上菌种长好后，4℃保存备用。
（三）示例
(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

(2)纯化大肠杆菌的方法

(3)菌种的保存方法

1. (2018·虹口模拟) 在分离和纯化土壤中自生固氮菌的实验中，不合理的操作是（ ）

使用过本题的试卷

1. (2018·虹口模拟) 在分离和纯化土壤中自生固氮菌的实验中，不合理的操作是（）