海洋石油污染正引起广泛关注,利用基因工程菌进行生物降解具有巨大的应用潜力。P450是石油降解的关键酶,用SalI和NdeⅠ联合酶切获得的P450基因,与甲图所示的质粒(pCom8)重组,导入土著菌种Y9,获得了基因工程菌P450/Y9。甲图中mel是黑色素合成基因,其表达能使白色的菌落变成黑色,aacCl是庆大霉素(一种抗生素)抗性基因,限制酶NdeⅠ、XhoⅠ和SspⅠ在原质粒上均只有一个酶切位点,数字表示酶切位点间的碱基对数。乙图表示几种限制酶的识别序列和切割位点。
经测定原质粒为7.6kb(1kb为1000个碱基对),重组质粒经NdeⅠ、SspⅠ联合酶切后获得了6.0和1.2kb的两个片段,则目的基因的长度为kb。
第一步,配制培养基。除下表中的成分外,还必须添加和。
第二步,晶待检菌液用法接种在第一步配制的培养基上。
第三步,选择色菌落扩大培养即可获得所需的工程菌。
蛋白胨 |
酵母浸膏 |
NaCl |
KCl |
MgCl2 |
H2O |
pH |
20.0 g |
5.0 g |
0.5 g |
0.2 g |
1.0 g |
1000 mL |
7.0 |
为检测基因工程菌降解石油的能力,科研人员做了如下4组实验,测定不同时间各组的石油降解率,实验结果见图。
A组:单独使用Y9
B组:单独使用P450/Y9
C组:联合使用Y9、W3、F9、X1四种菌种
D组:联合使用P450/Y9、W3、F9、X1四种菌种