1. (2017·洛阳模拟) 已知图1，图2中标注了相关限制酶的酶切位点，且限制酶的切点是唯一的，外源DNA插入会导致相应的基因失活．请回答有关基因工程操作的问题：

1. （1） 图1表示的是一个经过的作为载体的质粒，其化学本质是 ． 作为基因表达载体，除图1所示结构外，还需具有 ．
3. （2） 根据图中所给信息，构建基因表达载体时，应选用的限制酶是 ． 若将基因表达载体导人大肠杆菌，一般先用钙离子处理，使其成为细胞，以利于吸收周围环境中的DNA分子；然后让基因表达载体在中与该细胞混合，调控温度完成转化过程．
5. （3） 为了筛选出含目的基因的大肠杆菌，应在培养基中添加 ， 培养一段时间后，平板上长出的菌落，用PCR技术鉴定时，所用的引物是图2中 ．