1. (2020·厦门模拟) 酵母菌的蛋白质可作为饲料蛋白的来源，有些酵母菌能以工业废甲醇作为碳源，研究人员拟从土壤样品中分离出可利用工业废甲醇的酵母菌，这样既能减少污染又可变废为宝。下图为主要操作流程示意图。

回答下列问题：

1. （1） 配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的，及时对培养基进行分装，并进行高压蒸汽灭菌：在加热排除高压锅内原有的后，将高压锅密闭，继续加热，通常在的条件下，维持15-30min，可达到良好的灭菌效果。
3. （2） 取步骤②中梯度稀释后的适量液体加入无菌培养皿，然后将高压蒸汽灭菌后的培养基冷却至（25℃/50℃/80℃）左右时倒入培养皿混匀（步骤⑧），冷凝后将培养皿倒置，在适宜的条件下培养一段时间。
5. （3） 挑取平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线纯化，下列叙述合理的是。

   a.为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌

   b.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量

   c.划线时不能划破培养基表面，以确保能正常形成菌落

   d.第二区以后的划线起始端要与上一区的划线的末端相连接，最后一区的划线末端不能与第一区的划线相连

7. （4） 步骤⑤的培养中，应加入 作为碳源，并加入适量的氮源、无机盐和水等成分。为监测发酵罐中酵母菌活细胞的密度，取2mL发酵液稀释1000倍后，加入等体积台盼蓝染液染色，用如图所示的计数室规格为25x16型的血细胞计数板计数，要达到每毫升4x10⁹个活酵母菌细胞的预期密度，理论上，图中标号①～⑤五个中格里的呈色的酵母菌细胞总数应不少于个。