①整个操作过程需要在酒精灯旁进行
②在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环
③在灼烧接种环之后,立刻进行划线
④在作第二次以及其后的划线操作时,总是从上一次划线的末端开始划线
⑤不要将最后一区的划线与第一区相连
⑥在划线操作结束时,不需要灼烧接种环
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