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  • 1. (2019高二下·朝阳期末) 水稻是世界上最重要的粮食作物之一,是全球约半数人口的主粮。然而水稻只有在磷营养充足的条件下才能保证高产。S基因是番茄线粒体中的磷转运蛋白基因,科研人员将S基因转入水稻体内,以期望获得低磷条件下的高产水稻。操作流程如下:

    1. (1) 磷是构成等物质的重要组成元素。土壤溶液中的磷浓度一般不超过2×10-12 mol/L,而植物细胞内的磷浓度却大于10×10-4 mol/L,因此植物从土壤中吸收磷的方式是
    2. (2) 提取番茄细胞的总RNA经过得到的cDNA,用限制酶处理后与载体结合并转入受体菌体内,建立番茄的,从中获取S基因。但此途径得到的S基因两端没有限制酶识别序列,利用技术添加相应序列并扩增。已知Ti质粒转录方向为顺时针,相关酶切位点如下表。

      通过测序已知S基因部分序列如下:

      请补充扩增结束后,大多数DNA片段的碱基对序列

    3. (3) 构建含S基因的表达载体时,通常用两种限制酶切割含S基因的DNA片段和Ti质粒,限制酶作用部位为(填化学键名称)。将重组Ti质粒转入农杆菌时,可以用处理农杆菌,使得表达载体易于导入。为了使S基因能够正确表达,还应插入的元件是什么(请在下图中画出并标注元件名称)。

    4. (4) 将表达载体导入农杆菌以及农杆菌与水稻愈伤组织共培养时需要进行筛选,这两步骤的培养基中都需要加入,以筛选出成功导入表达载体的农杆菌和水稻愈伤组织。
    5. (5) GUS基因的产物能催化无色物质K呈现蓝色。经无色物质K处理愈伤组织并筛选出了呈现蓝色的组织,说明
    6. (6) 农杆菌Ti质粒上的序列,可以从农杆菌中转移并随机插入到被侵染植物细胞的中。随机挑选三个转基因株系甲、乙、丙进行阳性检测试验。分别提取每个样品的基因组,利用限制酶进行酶切电泳验证,结果如下图所示,

      甲、乙、丙转基因植株中分别被转入了个S基因。

    7. (7) 通过盆栽转基因株系,分别在低磷条件下和磷正常条件下测定以验证转入S基因是否能达到目的。测定结果如下图。

      结果显示,从而说明低磷条件下,S基因可以调控转基因水稻对磷的吸收与积累,提高转基因水稻产量。

    8. (8) 本实验的研究价值在于

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