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  • 1. (2020高三上·邗江月考) 有一大小为2500bp质粒A,其上包含BglⅡ、Sau3AⅠ及EcoRⅠ的酶切位点;现需要将下图所示的目的基因插入到质粒中,构建重组质粒,并转化大肠杆菌细胞,从而实现目的基因的大量扩增。三种限制酶的酶切位点如下:

    限制酶

    Bg/II

    Sau3A I

    EcoR I

    识别序列及切割位点

    1. (1) 质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有(答出两点),而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子。
    2. (2) 质粒A可被BglⅡ、Sau3AⅠ及EcoRⅠ三种限制性内切酶同时切割。单独用BglⅡ或Sau3AⅠ单独切割,都是得到一条长链,BglⅡ和EcoRⅠ同时切割得到2个400 bp和1个1700 bp片段, Sau3AⅠ和EcoRⅠ同时切割得到2个200bp和1个2100bp片段。则BglⅡ的切割位点和Sau3AⅠ的切割位点间最短长度为,三种酶同时切割时会产生个游离的磷酸基团。
    3. (3) 用质粒A和目的基因构建重组质粒时,选用BglⅡ和Sau3AⅠ进行切割,通过酶作用后形成键获得重组质粒。若只考虑酶切后的一个目的基因片段和一个质粒成功重组,可产生2种类型的重组质粒,简要解释其原因是
    4. (4) 为了扩增重组质粒,需将其转入处于态的大肠杆菌。科研人员发现,作为受体细胞的大肠杆菌自身含有限制酶BglⅡ,上述两种类型的重组质粒只有一种能在大肠杆菌中保存且扩增,写出该重组质粒形成时黏性末端连接部位的碱基对序列,对于该部位,这两种酶(填都能、都不能或只有一种能)切开。

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