1. 荧光蛋白(GFP)在紫外光下会发出绿色荧光，某科研团队将GFP基因插入质粒P中构建了重组质粒载体P₀ ， 用于基因工程中基因表达载体(P₁)的筛选和鉴定。部分过程如下图所示，下表为部分限制酶的识别序列及切割位点。回答下列问题。

1. （1） 过程①中用EcoRⅤ酶切获得的目的基因具有末端，过程②表示利用PCR技术扩增目的基因，前提是要根据，设计出引物，此外还需在引物的一端加上序列，以便于P₁的构建和筛选。
3. （2） 过程③中，质粒P₀需用限制酶切割，才能与扩增出的目的基因在酶作用下形成P₁。
5. （3） 为了筛选出含有质粒P₁的菌落，需采用添加的培养基平板进行培养，在紫外光激发下的菌落，即为含有P₁的菌落。
7. （4） 提取经上述筛选所得菌落的RNA，通过获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出目的基因，可能的原因是。