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  • 1. 基因检测是指通过检测生物体中的DNA序列,以了解生物体基因状况的技术手段。Sanger双脱氧链终止法是DNA测序的基本方法,其原理是:核酸模板在核酸聚合酶、带有3'-OH末端的单链核苷酸引物、四种dNTP存在的条件下复制或转录时,如果在反应系统中分别引入单一种类的ddNTP(即2、3双脱氧核苷三磷酸,在脱氧核糖的3'位置缺少一个羟基,故不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键),只要ddNTP掺入链端,该链就停止延长,链端掺入dNTP的片段可继续延长。通过电泳将不同长度的片段分开,DNA片段越小,距离起点越远,根据末端核苷酸可得到原始序列信息。具体流程图如下。

    1. (1) 若待测核酸模板为双链DNA,首先要作处理,与引物结合后,在DNA聚合酶作用下子链沿方向(填“5'端向3'端”或“3'端向5'端”)进行延伸反应。若待测核酸模板为RNA,则需要在酶的帮助下合成DNA单链片段。
    2. (2) ddNTP为2,3-双脱氧核苷三磷酸,只要ddNTP掺入链端,该链就停止延长的原因是  
    3. (3) 假设某反应体系中,待测DNA单链序列3'GTACCGTA5',加入4种dNTP和ddATP,经过双脱氧链终止法处理,会得到种片段,其中最短的片段序列是
    4. (4) 假设某次Sanger双脱氧链终止法测序得到的电泳图如下图所示,则待测DNA序列从5'端到3'端为

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