1. (2021高二下·肇庆期末) 新冠肺炎病毒是一种RNA病毒，其表面的S蛋白是主要的病毒抗原，下图是利用基因工程生产2019-nCoV病毒疫苗的部分流程图，回答下列问题：

1. （1） 获得S基因的方法为：提取病毒的RNA并利用特定的酶对其进行切割获得控制合成S蛋白的RNA片段，并以该片段为模板，通过逆转录过程得到相应的DNA片段即为S基因，该步骤中用于切割RNA的酶（填“是”或“否”）限制性核酸内切酶，理由是。
3. （2） 扩增S基因时需要根据设计一对引物，为了使扩增后的S基因能够与载体相连，需要在引物的一端连上特定的。
5. （3） 构建基因表达载体是基因工程的核心步骤，该步骤一般用两种不同的限制酶切割质粒和目的基因，目的是。
7. （4） 步骤②常需要用Ca²⁺处理大肠杆菌，其目的是。