1. (2021·山东) 人类γ基因启动子上游的调控序列中含有 BCL11A 蛋白结合位点，该位点结合 BCL11A 蛋白后，γ基因的表达被抑制。通过改变该结合位点的序列，解除对γ基因表达的抑制，可对某种地中海贫血症进行基因治疗。科研人员扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，以确定 BCL11A 蛋白结合位点的具体位置。相关信息如图所示。

1. （1） 为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达，需在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知，在 F₁～F₇末端添加的序列所对应的限制酶是，在 R 末端添加的序列所对应的限制酶是。本实验中，从产物扩增到载体构建完成的整个过程共需要种酶。
3. （2） 将构建的载体导入除去 BCL11A 基因的受体细胞，成功转化后，含 F₁～F₆与 R 扩增产物的载体表达荧光蛋白，受体细胞有荧光，含 F₇与 R 扩增产物的受体细胞无荧光。含 F7 与 R 扩增产物的受体细胞无荧光的原因是。
5. （3） 向培养液中添加适量的雌激素，含 F₁～F₄与 R 扩增产物的受体细胞不再有荧光，而含 F₅～F₆与 R 扩增产物的受体细胞仍有荧光。若γ基因上游调控序列上与引物序列所对应的位置不含有 BCL11A 蛋白的结合位点序列，据此结果可推测，BCL11A 蛋白结合位点位于，理由是。