1. (2021高三上·海安开学考) 家畜胚胎的性别鉴定技术对畜牧业的发展具有重要意义。巢式PCR扩增反应在两次PCR反应中使用两组不同引物，先使用外引物对目标区域DNA片段进行第一次PCR扩增，产生中间产物，然后使用内引物对中间产物进行第二次PCR扩增，产生目标产物。下图是式PCR工作原理示意图，请回答：

1. （1） 巢式PCR反应体系中需要加入模板、、、引物、Mg²⁺、缓冲液等。
3. （2） 相比于常规PCR获得的产物而言，巢式PCR获得的产物特异性，原因是如果利用外引物扩增产生了错误片段，再利用内引物扩增在错误片段上进行引物配对并扩增的概率。
5. （3） 巢式PCR通常在一个试管中进行第一阶段反应，然后将中间产物等转移到第二试管中进行第二阶段反应，不在同一试管完成的主要原因是。
7. （4） 科研人员利用多重巢式PCR技术同时扩增Y染色体上雄性决定基因（SRY）和常染色体上的酪蛋白基因（CSN1S1），进行早期胚胎的性别鉴定，并将鉴定后的胚胎进行移植。下表是主要实验步骤，请完成下表：

   实验目的	方法步骤要点
   胚胎样品DNA提取	选取囊胚的①细胞提取DNA
   PCR引物的设计和合成	根据牛的SRY和CSN1S1基因序列设计合成②对引物
   PCR过程	预变性→③→退火→延伸
   观察扩增结果	电泳分析
   受体牛④处理	对受体牛注射前列腺素
   胚胎移植	将筛选出的胚胎移植到受体牛的子宫内

9. （5） 电泳结果如下图所示，1~5号为取自不同胚胎的DNA样品进行巢式PCR的产物。A和B条带中代表CSN1S1的是。可以确定1~5号中号胚胎为雌性。

   

11. （6） 牛胚胎性别的鉴定除了可以利用PCR外，下列方法也可行的有。

    ①差速离心法

    ②核酸探针杂交法

    ③染色体核型分析法

    ④H-Y抗血清免疫学法（H-Y抗原编码基因位于Y染色体上）