1. (2021·辽宁) PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因，研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列（简称phb2基因），大小为0.9kb（1kb=1000碱基对），利用大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题：

1. （1） 为获取phb2基因，提取该动物肝脏组织的总RNA，再经过程得到cDNA，将其作为PCR反应的模板，并设计一对特异性引物来扩增目的基因。
3. （2） 图1为所用载体图谱示意图，图中限制酶的识别序列及切割位点见下表。为使phb2基因（该基因序列不含图1中限制酶的识别序列）与载体正确连接，在扩增的phb2基因两端分别引入和两种不同限制酶的识别序列。经过这两种酶酶切的phb2基因和载体进行连接时，可选用（填“E.coliDNA连接酶”或“T₄DNA连接酶”）。

   

   相关限制酶的识别序列及切割位点

   名称	识别序列及切割位点	名称	识别序列及切割位点
   HindⅢ	A↓AGCTT TTCGA↑A	EcoRI	G↓AATTC CTTAA↑G
   PvitⅡ	CAG↓CTG GTC↑GAC	PstI	CTGC↓AG GA↑CGTC
   KpnI	G↓GTACC CCATG↑G	BamHI	G↓GATCC CCTAG↑G

   注：箭头表示切割位点

5. （3） 转化前需用CaCl₂处理大肠杆菌细胞，使其处于的生理状态，以提高转化效率。
7. （4） 将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养，随机挑取菌落（分别编号为1、2、3、4）培养并提取质粒，用（2）中选用的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电分离，结果如图2，号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。

   

   注：M为指示分子大小的标准参照物；小于0.2kb的DNA分子条带未出现在图中

9. （5） 将纯化得到的pHB2蛋白以一定浓度添加到人宫颈癌细胞培养液中，培养24小时后，检测处于细胞周期（示意图见图3）不同时期的细胞数量，统计结果如图4。分析该蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖可能的原因是将细胞阻滞在细胞周期的（填“G₁”或“S”或“G₂/M”）期。