1. (2022·安徽模拟) 小麦纯合自交系川农16具有穗大、粒多、抗病等优良特性，可通过导入抗除草剂基因bar使其获得抗除草剂性状，具体技术路线如图所示。其中抗除草剂基因bar来源于野生型植物甲，抗草甘膦基因aroA是选择标记基因，报告基因能在特定情况特定组织中表达。

1. （1） 图中构建表达载体的过程需要用两种不同的限制酶切割，比用一种限制酶切割的优点是。很多启动子具有物种特异性，在图中Ti质粒的T-DNA中插入除草剂抗性基因bar时其上游启动子应该选择。

   A．野生植物甲启动子                    B．农杆菌启动子                    C．小麦川农16的启动子

3. （2） 农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带插入其内的片段转移到受体细胞。筛选已转化的愈伤组织，需使用含的选择培养基。但在转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织也可能在选择培养基上生长。含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。用K分别处理以下愈伤组织，出现蓝色的是。

   ①无农杆菌附着的未转化愈伤组织

   ②无农杆菌附着的转化愈伤组织

   ③农杆菌附着的未转化愈伤组织

   ④农杆菌附着的转化愈伤组织

5. （3） 转化后经筛选的愈伤组织需转换培养基继续培养，此时培养基需添加的植物激素为，部分接种在无激素培养基上的芽也能长根，原因是。培养获得的转基因植株不一定稳定遗传，须将转基因植株进行，继续筛选，最终选育出抗除草剂纯合系。
7. （4） T-DNA序列可随机插入到愈伤组织DNA中导致插入位点基因功能丧失。上述实验中偶然获得了一个突变体F，产量明显低于小麦川农16。研究者用某种限制酶处理突变体F的DNA，得到图2，若以此为模板进行PCR扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列，需选择的引物是。