图1抗草甘膦外源基因结构图(CaMV35S为外源启动子、NOS为外源终止子)
①在确定扩增对象后,从中获得待扩增基因序列,以此为依据可设计引物。该小组拟定的引物设计如表所示,其引物设计有一个是不科学的,请指出并说明原因。
基因 |
引物序列 |
产物片段大小 |
基因来源 |
Lectin |
F-5' GCC CTC TAC TCC ACC CCC ATC C-3' R-5' GCC CAT CTG CAA GCC TTT TTG TG-3' |
118 |
内源基因 |
CaMV35S |
F-5' GGG ATT-3' R-5' AAT CCC-3' |
195 |
外源基因 |
NOS |
F-5' GAA TCC TGT TGC CGG TCT TG -3' R-5' TTA TCC TAG TTT GCG CGC TA -3' |
180 |
外源基因 |
CP4-EPSPS |
F-5' CTT CTG TGC TGT AGC CAC TGA TGC-3 R-5' CCA CTA TCC TTC GCA AGA CCC TTC C-3 |
320 |
外源基因 |
注:内源基因指大豆基因组内基因,外源基因指大豆基因组外基因。
②PCR扩增:在4个反应体系中分别加入(模板)、相应引物、酶、4种脱氧核苷酸等,并将PCR仪的温度设定为:变性94℃ 30s、复性58℃ 30s、延伸72℃ 40s,循环30次。“延伸”的温度设定为72℃,是因为该温度下。在设定的PCR体系下可以特异性扩增目标DNA片段,主要是因为具有特异性。
图2 NOS终止子PCR反应产物电泳分析
图3 内源基因lectin PCR反应产物电泳分析
注:M:标准参照物,1:阳性对照(基因标准品),2:阴性对照(普通大豆),3:核酸提取空白对照,4:待鉴定样本。