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  • 1. (2022·辽宁模拟) 随着全球转基因作物大规模种植和全球一体化下频繁的贸易流通,转基因监管的任务将越来越重。为了还给消费者知情权和选择权,多个国家和地区对转基因产品实行标识管理制度,这些法规实施的前提就是要建立稳定、准确的转基因检测技术。PCR转基因检测技术以其特异性强、快速和准确等优点被多国检测工作者使用,该技术通常包括核酸提取、核酸扩增、扩增产物检测3个步骤。某研究小组设计并完成了“转基因抗草甘膦大豆定性PCR检测”实验,请参与实验设计并回答相关问题(草甘膦为常用除草剂;转基因抗草甘膦大豆的外源基因构建图如图1所示):

    图1抗草甘膦外源基因结构图(CaMV35S为外源启动子、NOS为外源终止子)

    1. (1) 提取DNA:取待测大豆组织裂解破碎,进行DNA提取和纯化,得到待测大豆基因组DNA。该过程的常用的试剂有EDTA、SDS、NaCl、酒精等。在研磨液中加入NaCl的目的是;纯化DNA时可使用酒精,是因为
    2. (2) DNA扩增:

      ①在确定扩增对象后,从中获得待扩增基因序列,以此为依据可设计引物。该小组拟定的引物设计如表所示,其引物设计有一个是不科学的,请指出并说明原因

      基因

      引物序列

      产物片段大小

      基因来源

      Lectin

      F-5' GCC CTC TAC TCC ACC CCC ATC C-3'

      R-5' GCC CAT CTG CAA GCC TTT TTG TG-3'

      118

      内源基因

      CaMV35S

      F-5' GGG ATT-3'

      R-5' AAT CCC-3'

      195

      外源基因

      NOS

      F-5' GAA TCC TGT TGC CGG TCT TG -3'

      R-5' TTA TCC TAG TTT GCG CGC TA -3'

      180

      外源基因

      CP4-EPSPS

      F-5' CTT CTG TGC TGT AGC CAC TGA TGC-3

      R-5' CCA CTA TCC TTC GCA AGA CCC TTC C-3

      320

      外源基因

      注:内源基因指大豆基因组内基因,外源基因指大豆基因组外基因。

      ②PCR扩增:在4个反应体系中分别加入(模板)、相应引物、酶、4种脱氧核苷酸等,并将PCR仪的温度设定为:变性94℃ 30s、复性58℃ 30s、延伸72℃ 40s,循环30次。“延伸”的温度设定为72℃,是因为该温度下。在设定的PCR体系下可以特异性扩增目标DNA片段,主要是因为具有特异性。

    3. (3) 扩增产物检测:可采用的方法。部分实验结果如图2、3所示。据图2初步判断,该大豆为(填“转基因”或“非转基因”)大豆。据图2、图3分析,其实验结果是(填“可信的”或“不可信的”)。

      图2   NOS终止子PCR反应产物电泳分析

      图3   内源基因lectin PCR反应产物电泳分析

      注:M:标准参照物,1:阳性对照(基因标准品),2:阴性对照(普通大豆),3:核酸提取空白对照,4:待鉴定样本。

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