1. (2021·大庆模拟) CBFI基因过量表达能提高拟南芥植株的抗寒性。苜蓿是包草料产业发展的主要草种，低温等逆境胁迫会导致苜蓿减产。科研人员从拟南芥植株中克隆得到冷诱导转录因子（AtCBF₁）基因，通过转基因技术培育抗寒紫花苜蓿，以使苜蓿安全越冬和提高产量。回答不列问题：

1. （1） 在扩增AtCBF₁基因的过程中，先根据设计引物，再进行PCR扩增。扩增时，反应体系的初始温度设置在90~95℃的目的是。PCR过程中需要使用酶。
3. （2） 回收PCR产物并酶切后用将AtCBF₁ 基因连接到T质粒上，以得到T-CBF₁重组质粒。构建T-CBF₁重组质粒时，同时使用BamHI和SacI进行双酶切的目的是。
5. （3） 将目的基因导入受体细胞，培育后筛选转化阳性的植株。若采用分子杂交技术检测转基因紫花苜蓿植株目的基因的转录水平，则需要将片段制成探针。
7. （4） 为进一步研究转基因紫花苜蓿的抗寒机制，还需要进一步开展研究。请完成下列研究技术路线图：。