1. (2022高二下·洛阳期中) 农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。植物基因工程中常用含有重组Ti质粒的农杆菌和受体植物细胞的愈伤组织共培养，进行转基因操作。现有一段抗除草剂基因编码蛋白质的区域在克隆载体上，要将其转入烟草细胞，得到抗除草剂的转基因烟草。回答下列问题：

1. （1） 在构建基因表达载体的过程中，要先用对目的基因和Ti质粒进行切割，之后用酶连接形成重组质粒。该过程中科学家使用了两种不同的限制酶，原因是防止质粒和目的基因自身环化，并保证。
3. （2） 在以上重组质粒中，目的基因和抗卡那霉素抗性基因，都应该位于片段内，因为。
5. （3） 将重组的Ti质粒转入农杆菌可用处理。
7. （4） 除用上述基因工程方法获得抗除草剂的烟草，用物理或化学方法对大量正常烟草进行诱变处理，最终发现仅一株烟草（P）抗除草剂但同时花粉败育。为保留抗除草剂特性，最快能在中获得抗除草剂纯合子植株。