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  • 1. (2022高二下·洛阳期中) 检测新型冠状病毒核酸特异性序列的方法最常见的是实时荧光逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)法。TaqMan探针是实时荧光定量RT—PCR技术中一种常用探针(如图1),其V末端连接荧光基团(R),3'末端连接淬灭剂(Q)。当探针完整时,R发出的荧光信号被Q吸收而不发荧光。在PCR扩增过程中,当Taq酶遇到探针时会使探针水解而释放出游离的R和Q,R发出的荧光信号被相应仪器检测到,荧光信号的累积与PCR产物数量完全同步(如图2)。请据图回答:

    1. (1) 结合图1和图2分析,因PCR反应模板仅为,“荧光RT-PCR技术”所用的试剂盒中通常都应该含有酶、酶、TaqMan探针、引物、dNTP、Mg2+、缓冲体系等。
    2. (2) 若反应体系中存在靶序列,则TaqMan探针与结合,PCR反应时,酶沿模板利用外切酶的活性将探针酶切水解,放出游离的R和Q,R发出荧光信号。根据:TaqMan探针功能分析,探针中碱基序列的设计应主要依据
    3. (3) 每扩增一条DNA链,就有个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数(Ct值)与病毒核酸浓度有关,病毒核酸浓度越高,Ct值越
    4. (4) 虽然荧光RT-PCR是当前被广泛认可的检测手段之一,但是不断有“假阴性”现象报道,通过上述过程分析,“假阴性”的可能原因有(填字母)。

      a.通过咽拭子取样不规范或取样所获样本量不足

      b.在样本运输、检测中出现了损坏和污染

      c.病毒核酸关键序列发生突变

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