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  • 1. (2022高二下·南京期中) 科研人员通过转基因技术培育出超量表达P蛋白的转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中,含P基因的DNA片段以及Ti质粒的酶切位点如下图所示,其中强启动子能驱动基因的持续转录。请回答下列问题。

    限制酶

    识别序列

    ClaⅠ

    5′AT↓CGAT3′

    BamHⅠ

    5′G↓GATCC3′

    HindⅢ

    5′A↓AGCTT3′

    EcoRⅠ

    5′G↓AATTC3′

    KpnⅠ

    5′GGTAC↓C3′

    SacⅠ

    5′GAGCT↓C3′

    1. (1) 以RNA为模板,通过RT-PCR技术可获取P基因。进行RT–PCR时一般要加入4种脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)而不是脱氧核苷酸,其原因是,同时需加入的酶有。为了特异性扩增P基因序列,需根据设计特异性引物。
    2. (2) 在构建基因表达载体时,应优先选用的限制酶是,这样操作不仅使P基因在玉米植株中超量表达,还可利用T-DNA的特性,最终使P基因
    3. (3) 将农杆菌液浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养时,培养基中需加入,筛选出的愈伤组织经再分化过程形成丛芽,最终获得转基因玉米植株。
    4. (4) 对转基因再生玉米植株进行鉴定时发现,有些植株虽有P基因,但几乎没有P蛋白,造成该现象的原因可能有

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