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  • 1. (2022高三上·张掖模拟) 大丽轮枝菌(一种丝状真菌)是引起棉花黄萎病的主要病原菌。为观察大丽轮枝菌对棉花根的侵染路径,研究人员利用绿色荧光蛋白基因(sGFP)转染大丽轮枝菌,培育出表达绿色荧光蛋白的转基因菌株,主要过程如下(图中a链和b链分别是相应基因转录模板链)。分析回答下列问题:

    1. (1) 过程①中,PCR扩增sGFP的原理是,该过程除需要根据设计特异性引物序列外,为保证sCFP正确插入质粒中,还需要在引物的5'端添加限制酶识别序列,图中b链的黏性末端碱基序列(5'→3')为
    2. (2) 过程②需要的工具酶是。研究中将sGFP插入构巢曲霉启动子和终止子之间的目的是
    3. (3) 过程③中需要配制细菌培养基,配制时要在培养基灭菌并冷却到80℃左右后,再加入潮霉素溶液,潮霉素不能与培养基一同灭菌的原因是
    4. (4) 选择过程③筛选培养得到的不同农杆菌菌落,分别提取细菌质粒DNA,并用BamHI和HindⅢ完全酶切,可以得到种长度不同的DNA片段。
    5. (5) 将导入重组质粒的农杆菌加入大丽轮枝菌的孢子细胞悬液中,在适宜条件下完成转染后利用滤膜过滤得到孢子细胞,再在真菌培养基上培养获得菌落,最终通过检测筛选出绿色荧光蛋白旺盛表达的大丽轮枝菌。

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