1. (2023高三上·永州模拟) PCR是基因工程中常用的一种技术手段，它具有高灵敏度、高效率扩增目标DNA的特点，广泛应用于生命科学、医疗诊断、环境检测等方面。回答下列问题：

1. （1） 在基因工程中常用PCR来获取和扩增目的基因，其原理与细胞内DNA 复制类似。PCR反应需要在含Mg²⁺的缓冲溶液中进行，其中Mg²⁺的作用是。扩增过程按变性、复性和延伸三个步骤循环进行，其中复性温度的设定非常关键，需要根据引物的碱基数和种类来设定，长度相同但的引物需要设定更高的复性温度。
3. （2） 检测目的基因是否在受体细胞中发生转录时也需借助PCR技术。首先从的生物组织中提取总mRNA，再通过过程合成cDNA用于PCR扩增，进而检测目的基因的表达情况。
5. （3） 基因工程中目的基因插入的位点通常具有不确定性，若要检测目的基因所插入染色体的位置则可采用反向PCR技术。下图是利用反向PCR技术分析基因a所插入染色体位置的流程图。

   

   ①步骤I、Ⅱ所需要的酶分别是、。

   ②已知基因a的一条单链序列为：5′-GCAATGCGTAGCCTCT------AACTATGCGCTCATGA-3′（虚线处省略了部分核苷酸序列），则在步骤Ⅲ中选用的PCR引物是。

   A.5′-AACTATGCGCTCATGA-3′    B.5′-TTGATACGCGAGTACT-3′

   C.5′-GCAATGCGTAGCCTCT-3′    D.5′-AGAGGCTACGCATTGC-3′