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高中生物学
/
1.
(2022高三上·开封模拟)
某种荧光蛋白(GFP)在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光,这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白(L1)基因连接在GFP基因的5’端,获得了L1-GFP融合基因(简称为n),并将其插入质粒P,构建基因表达载体P1,其部分结构和酶切位点的示意图如下(图中E1~E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同)。
回答下列问题:
(1) 据图推断,该团队在将n插入质粒P时,应使用图示中的
进行酶切,这是为了保证
。
(2) 体外利用PCR技术扩增基因n时,①使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是
;②利用PCR技术扩增基因n时,设计的引物之间不能
,以避免影响引物与相应单链的结合。
(3) 将P1转入大肠杆菌后,若在该大肠杆菌中观察到了绿色荧光,则说明L1基因在大肠样菌中依次完成了
过程。
(4) 真核生物基因(目的基因)在大肠杆菌细胞内表达时,表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解,在实验中应选用
的大肠杆菌作为受体细胞,在蛋白质纯化的过程中应添加
的抑制剂。
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