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  • 1. (2022高三上·源城月考)  hTERT基因可引起端粒延长,延长细胞生命周期。科研人员利用P2A基因将hTERT基因和增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP基因)连接,使之共表达,从而构建出含hTERT-P2A-EGFP目的片段的重组质粒,为进一步研究hTERT基因的功能和构建永生细胞系奠定基础。hTERT-P2A-EGFP目的片段的结构和大小如下图,回答下列问题:

    1. (1) 科研人员首先利用PCR技术对目的基因hTERT、P2A、EGFR进行扩增。PCR的原理是,反应体系需要提供种引物,引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的(填“3′”或“5′”)端开始连接脱氧核苷酸。
    2. (2) 构建hTERT-P2A-EGFP目的片段时需使用的工具酶有,都能作用于(化学键)。
    3. (3) 为了初步鉴定hTERT-P2A-EGFP目的片段是否构建成功,科研人员对连接体系中的基因进行扩增,并对扩增产物的大小进行测定。若扩增产物的大小为,则说明了hTERT基因和EGFP基因已连接到P2A基因上。
    4. (4) 为进一步验证重组质粒是否成功表达,科研人员将受体细胞平均分成A、B两组,其中A组受体细胞导入重组质粒,B组受体细胞导入。支持“重组质粒成功表达”的实验结果为:

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