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  • 1. (2023高三上·西城期末) CRISPR/Cas9是一种基因编辑技术,科研人员对其进行了一系列改造。

    1. (1) Cas9蛋白能与人工设计的sgRNA形成复合体(如图1)。复合体中的sgRNA与目的基因按照原则特异性结合。复合体在sgRNA引导下结合目的基因,Cas9蛋白切割目的基因造成双链断裂,细胞在修复断裂的DNA时会随机插入、删除或替换部分碱基对,从而引发

    2. (2) 将编码Cas9蛋白的基因改造后形成新基因dCas9,与Cas9蛋白相比,dCas9蛋白失去剪切活性,但与sgRNA结合等功能不变。构建能够表达dCas9的质粒A,设计一系列与红色荧光蛋白基因(RFP基因)上游不同部位结合的sgRNA序列(如图2),并以此为依据构建能表达sgRNA的质粒B,将质粒A、B共同导入含有RFP基因的大肠杆菌,测定大肠杆菌红色荧光强度,实验结果如图3所示。

      实验结果显示,对照组的红色荧光强度约为sgRNA3组的倍。由实验结果可以得出:

    3. (3) VP64蛋白可结合RNA聚合酶,激活基因的转录,但VP64蛋白无法识别或结合特定的DNA片段。科研人员欲利用上述系统和VP64蛋白促进特定基因表达,请设计促进细胞中已存在的基因X表达的方案
    4. (4) 请写出CRISPR/Cas9及其改造产品的在科学研究中的应用

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