1. 如图是将乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程图。巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母，能将甲醇作为其唯一碳源。该酵母菌体内无天然质粒，科学家改造出了图中所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达。已知当甲醇作为唯一碳源时，该酵母菌中AOX1基因受到诱导而表达[5′AOX1和3′AOX1(TT)分别是AOX1基因的启动子和终止子]。请分析回答下列问题：

1. （1） 为实现HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该选择切割质粒，并在HBsAg基因两侧的A和B位置接上，这样设计的优点是

   。

3. （2） 酶切获取HBsAg基因后，需用将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取。
5. （3） 步骤3中应选用限制酶来切割重组质粒以获得重组DNA，然后再将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。
7. （4） 为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入以便筛选；若要检测转化后的细胞中是否含有HBsAg基因转录产物，可以用技术进行检测。
9. （5） 转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。