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  • 1. (2023高三下·浙江月考) IL-6(白细胞介素6)在体内过量表达会引发多种免疫性疾病。在免疫疗法中,利用人源IL-6抗体结合过量的IL-6进行治疗比使用鼠源IL-6单抗效果更好、风险更小。科研人员利用农杆菌转化法将人源IL-6抗体基因转入某种植物中并成功表达。回答下列问题:

    1. (1) 将IL-6注射到小鼠体内,取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选出进行扩大培养,可规模化生产鼠源IL-6抗体。与人源抗体相比,前者在实际应用中除了可能因免疫排斥导致效果较差外,还可能具有的潜在风险是
    2. (2) 用限制性内切核酸酶和DNA连接酶处理人源IL-6抗体基因与,构建表达载体,再将其与经处理的农杆菌共培养。培养农杆菌的培养基成分通常包括蛋白胨、酵母浸出液、无机盐和水,其中蛋白胨可以为农杆菌提供哪些营养成分

      (A.碳源            B.氮源            C.抗生素            D.维生素)

    3. (3) 利用筛选后的农杆菌感染植物愈伤组织后,将愈伤组织置于含有抗生素的培养基中继续培养,抗生素的作用是筛选转化成功的愈伤组织细胞及。在适宜配比的激素诱导下,细胞不断分裂,并经过程形成胚状体,继续发育形成试管苗。试管苗移栽到土壤前,通常需在经的珍珠岩或蛭石中进行炼苗。
    4. (4) 利用凝胶电泳和分子杂交技术检测人源IL-6抗体基因是否成功表达。完善以下实验思路:

      ①将幼苗叶片液氮冷冻并,用苯酚法提取叶片总蛋白,制成样品。

      ②将置于缓冲溶液中,再向加样孔中加入蛋白样品,由于人源ⅡL-6抗体是酸性蛋白质,所以加样孔应朝向极。

      ③电泳分离结束,转移到PVDF膜上,利用技术进行检测。

    5. (5) 在利用植物体作为生物反应器进行人源IL-6抗体规模化生产前,除对表达剂量进行检测外,还需要对抗体的进行检测。进一步研究发现,转基因植物叶片中人源IL-6抗体表达水平较低,这与植物叶肉细胞中基因X的表达有关。可采取基因敲除技术将neo基因定向插入到基因X中,使其表达失活。在使用PCR检测基因X是否被敲除时,至少一侧的引物需要根据的碱基序列设计。

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