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高中生物学
/
综合题
1.
(2023高三下·辽宁月考)
某抗膜蛋白治疗性抗体药物研发过程中,需要表达N蛋白胞外段,制备相应的单克隆抗体,增加其对N蛋白胞外段特异性结合的能力。N蛋白胞外段单克隆抗体制备流程如下图:
(1) 用N蛋白胞外段作为抗原对小鼠进行免疫后,取小鼠腺组织用
方法或
酶处理,制成细胞悬液,置于含有
气体的CO
2
培养箱中培养,离心收集小鼠的B淋巴细胞,与骨髓瘤细胞进行融合。
(2) 用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选,获得杂交瘤细胞,将其接种到96孔板,进行
培养。用
技术检测每孔中的抗体,筛选既能产生N蛋白胞外段抗体,又能大量增殖的单克隆杂交瘤细胞株,经体外扩大培养,收集
,提取单克隆抗体。
(3) 利用上述流程制备的N蛋白胞外段抗体能准确识别
的细微差异,与之发生特异性结合,并可
,因此被广泛用作诊断试剂。
(4) 利用小鼠制备的抗体是鼠源抗体,鼠源抗体具有外源性,会被人体免疫系统当作抗原而清除(称为人抗鼠抗体反应即HAMA反应)。抗体结构示意图如下,引起HAMA反应的主要是“C区”,通过制备人鼠嵌合抗体可以解决HAMA反应。现利用重组DNA技术可以制备人鼠嵌合抗体,请写出简要制备思路:
。
(5) 为了进一步减少免疫排斥反应,科学家利用噬菌体展示库技术生产出全人源化单抗(单抗成分全部由人的基因编码)。具体操作如下,用PCR技术从生物体内扩增出整套编码人抗体的基因序列,克隆到噬菌体载体上,并以融合蛋白的形式表达到噬菌体表面,从而可以方便地对抗体进行筛选、扩增。但是利用这种方法制备的抗体结构准确程度下降,原因是
。
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