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高中生物学
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1.
(2023高三下·河南月考)
研究表明,Lm-PHB2蛋白在细胞核内起调节细胞周期的作用。为研究Lm-PHB2蛋白的生物学活性,研究人员进行了以下实验.RT-PCR是将RNA的反转录(逆转录,RT)和cDNA的聚合酶链扩增(PCR)相结合的技术,LacZ基因的编码产物在X-gal和IPTG存在下,可使大肠杆菌菌落呈现蓝色,否则菌落呈现白色。回答下列问题:
(1) 过程①需要的酶有
,该过程需要在目的基因上添加适宜的酶切位点,扩增时,引物和酶切位点的设计依据分别是
和
。
(2) 过程③中筛选和培养大肠杆菌的培养基中需要加入
和碳源、氮源、水和无机盐等物质,挑取
色菌落中的微生物培养并提取质粒,用限制酶进行酶切,再对产物进行检测。
(3) 为检测过程⑤得到的大肠杆菌是否表达Lm-PHB2基因,研究人员以注射了
后获得的小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞制备单克隆抗体,之后再用制备的单克隆抗体与大肠杆菌中蛋白质进行
实验。
(4) 有假说认为Lm-PHB2蛋白能通过抑制宫颈癌细胞的DNA复制来抑制其增殖,请补全验证这一假说的基本思路:
,检测两组实验中处于不同细胞周期时期的细胞数量。
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