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  • 1. (2023高三下·长沙月考) 四尾栅藻是一种淡水藻类,繁殖快、适应性强,可作为制备生物柴油的重要原料之一。为提高四尾栅藻的油脂含量,研究人员将从含油量高的紫苏中获得的二酰甘油酰基转移酶基因DGAT1与pBI121质粒构建表达载体,经转化成功获得高产油脂四尾栅藻,主要研究过程如下图,其中DGAT1-F(5'-GCATCTAGAATGGCGATCTTGGACTC-3')和DGAT1--CGGATCCCTACCTTGCACTAGCTTTTC-3')是以DGAT1基因为依据设计的一对引物,LacZ基因编码产物在X-gal和IPTG存在下,可以产生蓝色沉淀,使菌落呈现蓝色,否则菌落呈现白色。请回答下列问题:

    1. (1) 过程①中需要的酶有,过程②应选用的限制酶是
    2. (2) 过程③经转化的大肠杆菌通过__(方法)接种到培养基上继续培养。为筛选获得目标菌株,培养基应加入的成分有
    3. (3) 用两种限制酶切割DGAT1和pB1121,将其连接成重组表达载体,并将其导入四尾栅藻细胞中,与单酶切相比,双切酶的优点是(答出两点即可)。
    4. (4) 为检测表达载体转化四尾栅藻的情况及确定目的基因是否表达,研究人员进行了如下实验,请完成下表。

      实验步骤

      简要操作过程

      初筛培养

      经转化后的四尾栅藻接种于含的BG11固体培养基并放置于人工气候箱培养,一段时间后观察其生长情况

      在BG11固体培养基上分别挑取数个单藻落接种至BG11液体培养基中光照摇床培养,编号备用

      PCR验证

      收集四尾栅藻藻体,提取基因组DNA,以DGAT1-F和DGAT1-R为引物,进行PCR验证,未转化的四尾栅藻作对照

      油脂含量测定

      利用索氏抽提法测定的油脂含量

      结果处理

      统计并比较PCR验证结果及藻体中油脂的含量

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