1. (2023高二下·龙口月考) 自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N₂的细菌，将玉米种子用自身固氨菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如下图。请回答：

1. （1） 步骤①土样应取自当地（填“表层”或“深层”）土壤；步骤②需充分振荡20min，主要目的是。
3. （2） 步骤③将土壤悬浮液稀释了倍，步骤④所用的接种工具是。
5. （3） 下表为两种培养基的配方，步骤④应选其中的培养基，并加入琼脂后进行高压蒸汽灭菌、倒平板。纯化培养时，需同时进行未接种培养基的培养，目的是。

   Ashby培养基：甘露醇（C₆H₁₄O₆）10g，KH₂PO₄0.2g，MgSO4·7H₂O0.2g，NaCl0.2g，K₂SO₄0.3g，CaCO₃5g，蒸馏水1000mL。

   LB培养基：蛋白胨1g，酵母提取物5g，NaCl5g，蒸馏水1000mL，pH7.0-7.2

7. （4） 将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的菌种CM12为进一步鉴定其固氮，科研人员选用发芽一致的玉米种子进行3组盆栽实验，30d后测定土壤微生物有机氮含量，结果如下图。

   

   CK：对照处理组

   N：尿素处理组（每盆土壤中50mL有全营养液：成分为在1000mL无氮植物营养液中加入0.12g尿素）

   CM12：自生固氮菌CM12处理组（每盆土壤浇50mL接种自身固氮菌的无氮植物营养液）

   ①对照组（CK）的处理为。

   ②实验结果表明：施用尿素处理和接种固氮菌CM12处理均能显著增加土壤微生物有机氮含量。与尿素处理组相比，CM12处理组土壤微生物有机氮含量增加了约%。

   ③自生固氨菌较共生固氮菌（如根瘤菌）的应用范围更广，原因是。