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高中生物学
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1.
(2023·南通模拟)
酵母双杂交技术是筛选能与已知蛋白互作的蛋白质的方法,其主要原理如图1。黄瓜花叶病毒(CMV)可侵染200多种植物,病毒的外壳蛋白(CMVCP)直接参与病毒的细胞间转移、症状表现等。研究人员利用酵母双杂交技术,从CMV感染的番茄叶片cDNA文库中筛选出CMVCP互作蛋白基因,图2为构建CMVCP诱饵载体(能表达出BD-CP融合蛋白)的流程。请据图回答下列问题。
(1) 图1中,获得BD-X蛋白的关键是将相应序列连接形成融合基因,融合基因获得过程属于
(变异类型)。X与Y的结合能使转录因子的BD和AD同时结合到启动子上,进而招募酶x催化LacZ基因的转录,酶X是
。
(2) 图2中,过程①提取总RNA时选择有明显感染症状叶片的原因是
。过程②中通常利用RT-PCR技术获得cDNA,上述技术中不同循环次数的扩增产物电泳结果如图3,则最适宜的循环次数是
次,依据是
。
(3) 图2过程③构建诱饵载体时,为保证CPcDNA能定向插入到指定位置,需要在过程②设计PCR引物时,
。用获得的诱饵载体先转化大肠杆菌,再用
法将菌液接种到含
的选择培养基上,挑取阳性单菌落细胞进行测序,确认插入的基因序列正确。
(4) 获得CMV CP诱饵载体转化的酵母菌后,研究人员进一步开展CMV CP互作蛋白的筛选研究,其主要实验流程是:构建感染CMV的番茄cDNA文库→构建一系列靶蛋白载体→
→接种培养,获取呈
色的菌落细胞→筛选、鉴定互作蛋白。
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