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高中生物学
/
1.
(2023·运城模拟)
为了提高马铃薯对真菌病害的抗性,某科研小组进行了马铃薯转基因抗病育种的初步研究,其过程如下所示,请将其完善:
(1) 从生防木霉菌株中提取总RNA以及通过
过程合成cDNA。
利用PCR技术对目的基因Chi(抗菌基因)进行扩增;PCR产物与PMD
TM
18-T载体连接,转化到大肠杆菌,获得重组质粒PMD
TM
18-T-Chi。
(2) 植物表达载体的构建(如图所示):将重组质粒PMD
TM
18-T-Chi和p33ECR质粒用
(填具体酶)进行酶切,再用T
4
DNA连接酶连接,得到p33ECR-Chi。此过程中一般会使用高浓度的T
4
DNA连接酶,T
4
DNA连接酶的作用是
。表达载体中p35S是
识别和结合的部位。
(3) p33ECR-Chi工程菌的获得:将p33ECR-Chi质粒转化至农杆菌菌株中,在含
的培养基上获得白色菌斑,挑菌落,获得工程菌。
(4) 转基因植株的获得:通过农杆菌转化法将Chi基因转化到马铃薯栽培品种试管马铃薯的块茎中。试管马铃薯的块茎是马铃薯遗传转化的理想外植体,分析其具有的优点是
(写出两点)。
(5) 对马铃薯进行抗菌检测:从分子水平上可采用
法检测目的基因表达的产物;从个体水平上进行检测的操作是
。
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