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高中生物学
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1.
(2023·南通模拟)
通常真核细胞翻译的起始必须依赖于mRNA的5'端帽子结构,而内部核糖体进入位点(IRES)则是位于mRNA内部的核糖体识别、结合序列,IRES使翻译可以从mRNA内部开始。人溶菌酶和人乳铁蛋白是人乳中重要的抗菌蛋白,科研人员构建人溶菌酶基因(hLYZ)和人乳铁蛋白基因(hLTF)双基因表达载体,并获得转基因牛胚胎。下图表示双基因表达载体的主要构建过程,请回答下列问题。
(1) IRES的基本单位是
,翻译时核糖体在mRNA移动方向是
(5'→3'或3'→5')。与两个基因直接连接形成融合基因相比,两个基因之间插入IRES序列的意义是
。
(2) 为实现hLTF与IRES序列的连接,在PCR扩增基因片段时通常在引物的5'端添加特定的限制酶识别序列,而不在3'端添加的原因是
。
(3) 过程①中,用
切割质粒a、b后,再用
(方法)分离,收集质粒a的hLTF片段,与质粒b的大片段连接,获得重组质粒1。
(4) 过程②中,用BamHⅠ分别处理重组质粒1和质粒c,再连接形成的重组质粒不止一种,这是因为
。用BamHⅠ对重组质粒2进行酶切,获得的DNA片段大小为
。
(5) 科研人员以包含重组质粒2的脂质体转染乳腺上皮细胞时,在细胞培养液中加入一定浓度的新霉素的主要目的是
。选择乳腺上皮细胞作为受体细胞便于检测
。
(6) 研究人员试图以转hLYZ与hLTF的奶牛乳腺上皮细胞作为供体细胞,培养转基因克隆胚胎,在此过程中主要涉及的现代生物技术有
。
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