1. (2023·海南模拟) 重叠延伸PCR技术是设计含突变点碱基的互补核苷酸片段的引物，在PCR过程中，互补的核苷酸片段形成重叠，重叠的部分互为模板，通过多次PCR 扩增，从而获得突变基因的方法。科学家将枯草芽孢杆菌基因组上的甘油激酶编码基因glpk的第270位氨基酸M突变为I，构建出了对甘油的利用水平大大提升的枯草芽孢杆菌，其原理如下图。请回答下列问题：

1. （1） 含突变点碱基的互补核苷酸片段的引物是图中的。通过PCR1获得产物AB需要进行次的PCR扩增。
3. （2） 本实验获得点突变的目的基因两端为平末端，为便于构建基因表达载体，需要将限制酶BumHI和SalI的识别序列分别引入诱变甘油激酶编码基因的两端，操作思路是。
5. （3） 获取目的基因后，构建质粒载体，形成基因表达载体。基因表达载体上保证其能在宿主细胞中扩增的结构是，保证目的基因能正常转录的结构是。
7. （4） 对甘油激酶的改造属于工程的应用，其第一步是。