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  • 1. (2023·沈阳模拟) “多发性骨性连接综合征”是由编码成纤维细胞生长因子(FGF9)的基因突变所致,患者FGF9基因中某碱基对发生替换,使FGF9中相应的氨基酸发生替换。科研人员欲利用基因工程等技术获得含有该突变基因的模型小鼠,用来研究该病的发病机理。图1表示FGF9cDNA(由FGF9基因转录得到的mRNA逆转录而来)进行定点突变得到突变型FGF9cDNA的流程,图2为研究中所用的质粒(SpeI、HindⅢ、SmalI和BglⅡ分别代表相应的限制酶切割位点,以上限制酶切割产生的粘性末端不同)。请回答下列问题:

    1. (1) 图1虚线方框中的a链与d链在延伸过程中的作用是:既可作为又可以起到相当于的作用,使酶能够从a链与d链的3'端开始连接脱氧核苷酸。经PCR后获得的产物一般通过来鉴定。
    2. (2) 基因工程操作的核心步骤是。图2质粒中的C序列是,它是RNA聚合酶识别和结合的部位。图1中突变型FGF9cDNA的a链所在的DNA单链为转录的模板链,则引物1和引物4的5'端需分别添加酶的识别序列,才能与图2中的质粒正确连接。
    3. (3) 将构建的重组DNA分子通过技术导入受精卵,再经(答1点即可)等技术使其发育成模型小鼠。
    4. (4) 科研人员发现,已转入突变型FGF9cDNA的模型小鼠并未表现出“多发性骨性连接综合征”,从分子水平上寻找原因需采用的技术有。(答出2点)

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