1. (2023·杭州模拟) 某研究小组利用水稻细胞培育能产生HPV (人乳头瘤病毒)-LI 蛋白的水稻胚乳 细胞生物反应器，为获得HPV-L1  蛋白提供一种新的高效、低廉的途径，用于制备 HPV 疫苗。其基本流程包括表达载体的构建、农杆菌转化、水稻细胞转化、转基因植株的筛选等步骤，最终获得能产生含 HPV-L1  蛋白胚乳细胞的转基因水稻。回答下列问题：

1. （1） 目的基因的获取：根据研究目标，科研人员可以从  获取 HPV-L1  基因，或者也可以分析 HPV-L1  蛋白的氨基酸序列，经.得到 目的基因，随后，在合成基因的两端分别引入MLy I 和 Xho I酶切位点，目的基因两端设置不同酶切位点的目的是 。PCR 是获取HPV-L1 基因的一种方法，PCR 反应体系设计的两种引物，在引物间和引物内的碱基都不能互补，其原因是 。
3. （2） 农杆菌转化：科研人员构建了图所示的表达载体，将其与经  处理成感受 态的农杆菌细胞混合，并控制温度进行. 培养，完成转化和细胞复苏，随后将 菌液涂布在含  的培养基上培养，挑取菌落进行PCR 鉴定后再扩大培养待 用。

   

   注：T-DNA中标出的启动了属于 真核细胞表达系统

5. （3） 水稻细胞转化：取水稻种子脱壳后经处理，置于诱导培养基中发生过程形成愈伤组织。挑取生长良好的愈伤组织加入到(2)中得到菌液中 共培养，完成转化过程。为提高转化效率，下列措施中可以采用的是哪几项?  (A.不时摇动培养液  B 缩短培养时间 C.控制菌液中农杆菌浓度 D.降低培养温度) 
7. （4） 转基因水稻的筛选：将转化处理后的水稻愈伤组织放在含抗生素的培养基中除菌处理后，转移至含有. 的固体选择培养基中培养，并诱导出 ，继续培养得到转基因水稻。
9. （5） 为了检测是否成功导入 HPV-L₁ 基因并培育出能产生HPV-L1  蛋白的水稻胚乳细胞生物反应器，请完善以下实验思路：

   I. 分别提取纯化. 的 总 DNA 和蛋白质，经处理后分别固定在硝酸纤维素膜上 。

   Ⅱ.让待测DNA 与 HPV-L1   基因探针发生 ，放射自显影检测以确定目的基因已经成功导入。

   Ⅲ.让待测蛋白质与. ，放射自显影检测以确定目的基因已经成功表达。