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  • 1. (2023高二下·杭州期中) 崧蓝是常用中药板蓝根和大青叶的主要基原植物,有清热解毒、凉血利咽的功效,可防治病毒性感染。在各地广为栽培,但常因除草剂的侵害,造成质量和产量下降。链霉菌中的bar基因序列未知,其编码的乙酰转移酶能使除草剂的活性成分草丁膦失活,拟利用基因工程技术将bar基因导入崧蓝中,以获得抗除草剂的崧蓝植株。回答下列问题;

    1. (1) 为获取bar基因,需将链霉菌基因组DNA借助载体、微生物等所形成的中的所有基因进行表达,并用乙酰转移酶为抗原所制备出的灵敏度高的来检测表达产物。在该制备过程中,需从已免疫的小鼠(填一器官名称)中提取B淋巴细胞,并与骨髓瘤细胞共同培养,过程中需采用等方法诱导其融合(答出⒉点即可)。
    2. (2) 如图1和图2为各种限制酶的识别序列在质粒、含目的基因的DNA片段上的分布情况。在构建表达载体时,为防止DNA片段反向拼接和自身环化,需用限制酶(填BamHI、HindⅢ、EcoRI、Smal中的一种或几种)同时处理Ti质粒和含目的基因的DNA片段,并用进行连接。为提高形成重组DNA的成功率,除上述处理外,还可以采用改变温度和pH等环境条件、提高DNA连接酶的浓度、提高目的基因的浓度、(写出两种方法即可)

    3. (3) 将bar基因导入受体细胞。转化农杆菌时应添加以利于重组质粒进入农杆菌细胞;利用含重组质粒的农杆菌侵染崧蓝的叶片时,Ti质粒上的可以携带bar基因整合到崧蓝叶片细胞的染色体DNA上;将叶片转移到固体培养基上培养,培养基中加入抗生素的作用是,再转移到含有培养基上,筛选出已经转化的崧蓝细胞。
    4. (4) 取被侵染的崧蓝叶片组织接种到MS培养基中培养,经过或体细胞胚发生途径形成转基因植株,该过程中利用了原理。为检验bar基因是否表达,在分子水平上可用来检测其转录产物。

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