1. (2023高三下·辽宁模拟) 图中甲表示含目的基因的DNA片段，图乙表示质粒（已知PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ三种限制酶切割后产生的黏性末端都不相同）。请回答下列问题：

1. （1） 已知DNA的合成方向总是从子链的5'端向3'端延伸。利用P心R技术以图甲中的DNA片段为模板扩增目的基因，需要的引物有（从A，B，C，D四种单链DA片段中选择）。利用PCR扩增目的基因的过程由高温变性（0～95℃），低温复性（55～60℃入适温延伸（70～75℃）三个步骤构成一个循环，为使得DNA聚合醇能够重复利用，选用的酶应在℃处理后仍然具备催化活性。
3. （2） 要保证目的基因能与图乙中的质粒准接，要将（1）中选出的两种引物的5'端分别添加和两种限制酶的识别序列。在此基础上，对扩增的目的基因和质粒都用这两种限制酶处理，待基因表达载体构建完成后，加入含大肠杆菌的转化液中。要从中分离出含该重组质粒的大肠杆菌单菌落，请简述操作思路：。
5. （3） 从DNA分子结构分析，上述操作用到的工具酶包括和，其作用的共同点是都可以作用于DNA分子的键。
7. （4） 若要将重组质粒导入大肠杆菌，则一般先要用Ca^＋处理大肠杆菌，目的是使大肠杆菌处于一种生理状态。