1. (2023·平度模拟) 蜂毒肽又称蜂毒溶血肽，是蜂毒的主要活性成分之一，在抗菌、消炎、抗肿瘤乃至肌肉再生等方面具有一定应用价值。蜂毒前溶血肱原是 prepromelittin基因（以下简称PL基因）的表达产物，在蜜蜂体内合成后首先加工成蜂毒溶血肽原（蜂毒肽前体蛋白），其可被进一步水解而形成蜂毒肽。与蜂毒肽相比，蜂毒前溶血肽原具有较大的溶解度，且对细胞的破坏能力小，可以考虑利用基因工程方法在体外合成蜂毒肽的前体产物。

1. （1） 生产蜂毒肽常选用微生物做受体细胞，优点是；通过原核细胞（填“能”或“不能”）直接获得蜂毒肽吗，原因是。
3. （2） 为了解决（1）中的问题，对蜂毒前溶血肽原基因进行改造（如图1），以便于后期用羟胺（一种能专一性裂解特定两个氨基酸之间肽键的化合物）对生产出的蜂毒前溶血肽原进行裂解获得蜂毒肽。观察图1可知，改造后的DNA序列长度为bp，根据改造前后氨基酸序列的变化推测羟胺的识别位点是，获得该位点操作是。除此之外，与原DNA序列相比，改造后的序列中删除了Gly的对应序列，推测删除的理由是。

   

   注；图中所示的“原DNA序列”为蜂毒前溶血肽原的编码区序列的编码链，即转录时所用模板链的互补链。①甲硫氨酸，缩写为M，由起始密码子AUG编码；②丙氨酸（Asn），缩写为N；③甘氨酸（Gly），缩写为G，由密码子GGU、GGC、GGA、GGG编码。

5. （3） 根据改造后的基因序列，利用人工化学合成方法进行全基因合成，设计并合成引物对合成基因进行PCR扩增，将PCR产物和pGEX-4T-1载体利用酶进行基因表示载体的构建，获得蜂毒前溶血肽原与GST（一种标签蛋白）融合表达重组质粒pGEX-4T-1/PPMel（见图2）。已知扩增PL基因时设计的一条引物的序列是：引物M1：5'-GACACGAATTC -3'，已知EcoRI的识别序列是GAATTC，请续写出该引物的后8个碱基。

   

   注：promoter为启动子；AmpR为氨苄青霉素抗性基因

   图2 pGEX-4T-1/PPMel 重组质粒图谱