1. (2023高二下·广西月考) 某种病原体通过其S蛋白、D蛋白与人体细胞表面的受体结合而进入细胞，S蛋白和D蛋白是宿主抗体的重要作用位点。下图是科研人员利用S蛋白基因和D蛋白基因研制该病原体双抗原疫苗的技术步骤。

  

请回答下列问题：

1. （1） 将S基因与D基因融合需使用酶。PCR扩增时，反应体系需加入、耐高温DNA聚合酶、模板DNA、引物、扩增缓冲液和无菌水。其中引物会在模板DNA链的（填“5'”或“3'”）端进行DNA新链的延伸。
3. （2） 科学家欲用两种限制酶切割pX质粒。为使S-D基因能与pX质粒相连接，并在工程菌中表达时先合成S蛋白，则PCR过程中所使用的引物1的（填“5'”或“3'”）端，应添加限制酶的识别序列是。
5. （3） 将重组pX质粒导入工程菌前，需用钙离子处理工程菌，使其处于一种的生理状态，便于重组质粒的导入。
7. （4） 在筛选工程菌时，先后用两种抗生素进行影印培养实验（即先将工程菌接种到培养基A上，待长出菌落后使用无菌的绒毡布压在培养基A的菌落上，带出少许菌种，平移并压在培养基B上），则培养基A中应添加的抗生素为（填“青霉素”或“四环素”）。若培养基B中有存活的菌落，则这些菌落的细胞内（填“含”或“不含”）S-D基因。鉴定pX质粒和重组pX质粒是否导入工程菌还可采用的方法是。