1. (2023高二下·滕州期中) 新冠病毒是一种带包膜的RNA病毒，膜表面的刺突蛋白（S蛋白）与宿主细胞膜表面的受体ACE2结合，介导病毒进入宿主细胞。进一步研究发现，RBD是S蛋白中负责和受体ACE2结合的关键蛋白。基于以上研究，某科研团队研发了一种重组新冠病毒疫苗，制备过程如图所示。请回答下列问题：

1. （1） 为获得更多的RBD蛋白基因，可利用PCR技术进行扩增，该技术需要设计一对引物（引物1和引物2），引物的作用是，PCR过程完成三次循环所需引物的数目共为个。六次循环后，产生的双链等长的DNA片段数目是。
3. （2） 逆转录获得的RBD蛋白基因不含有限制酶识别序列，这就需要在对目的基因进行PCR扩增时，在设计的目的基因引物的一端加装限制酶的识别序列，应加在引物的（填“3'”或“5'”）端，为了避免目的基因自身环化，最好在两种引物的一端加装（填“相同”或“不同”）的限制酶的识别序列。
5. （3） 为了确定目的基因是否表达，应先从受体细胞中提取（填“RBD蛋白”或“所有蛋白质”），再利用抗原-抗体杂交法来检测。
7. （4） 下图所示的引物中，引物设计不合理，原因是。