1. (2022·福建) 美西螈具有很强再生能力。研究表明，美西螈的巨噬细胞在断肢再生的早期起重要作用。为研究巨噬细胞的作用机制，科研人员制备了抗巨噬细胞表面标志蛋白CD14的单克隆抗体，具体方法如下。回答下列问题：

（一）基因工程抗原的制备

1. （1） 根据美西螈CD14基因的核苷酸序列，合成引物，利用PCR扩增CD14片段。已知DNA聚合酶催化引物的3’—OH与加入的脱氧核苷酸的5’—P形成磷酸二酯键，则新合成链的延伸方向是（填“ 5’→3’ ”或“ 3’→5’ ”）。

   

3. （2） 载体和CD14片段的酶切位点及相应的酶切 抗性基因序列如图1所示。用Xho I和Sal 1分别酶切CD14和载体后连接，CD14接入载体时会形成正向连接和反向连接的两种重组DNA．可进一步用这两种限制酶对CD14的连接方向进行鉴定，理由是。

   培养能表达CD14蛋白的大肠杆菌，分离纯化目的蛋白。

   （二）抗CD14单克隆抗体的制备流程如图2所示：

   

5. （3） 步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射和。
7. （4） 步骤②所用的SP2/0细胞的生长特点是。
9. （5） 吸取③中的上清液到④的培养孔中，根据抗原—抗体杂交原理，需加入进行专一抗体检测，检测过程发现有些杂交瘤细胞不能分泌抗CD14抗体，原因是。
11. （6） 步骤⑥从中提取到大量的抗CD14抗体，用于检测巨噬细胞。