1. (2023高二下·杭州期末) Leber遗传性视神经病是一种严重的遗传病，患者线粒体内的ND4基因发生突变，患病基因由母亲传给孩子。目前常用“三亲婴儿”的方法帮助女性患者生下健康婴儿。“三亲婴儿”需取志愿者的去核卵细胞作为细胞质的来源，构建健康受精卵的流程简图如下。回答下列问题：

1. （1） "三亲婴儿"的诞生需依次用到核移植、、胚胎体外培养和等技术，属于(填“无性”或“有性”)生殖。该过程不能直接用女方的体细胞作为核供体的原因是。
3. （2） 某研究小组欲克隆ND4基因并研究其表达的蛋白，选用了下图所示的质粒进行实验。利用PCR扩增基因时，应当挑选的引物是(从下图引物中挑选)。为使目的基因的PCR产物能被限制酶切割，可通过引物使得PCR产物两端带上限制酶酶切位点，据图判断，质粒上所示的限制酶酶切位点中不能挑选的是哪几个?

   (A.BamHI B.Xhol C.HindIII D.XbaI)。

   

5. （3） 获得重组质粒后，可将其导入经处理过的大肠杆菌。除了用四环素筛选外，还可通过技术确认大肠杆菌中是否转入了ND4基因。
7. （4） 为使ND4基因在大肠杆菌内高效表达，所用启动子应选择(填“细菌”或“真核细胞")的，这样有利于大肠杆菌的RNA聚合酶与之结合。用培养基对含ND4基因的大肠杆菌进行扩大培养，合成ND4蛋白。已知ND4蛋白为胞内蛋白，若要提取ND4蛋白，需对扩大培养的菌体进行操作，并进一步破碎细胞以分离提纯ND4蛋白。为探究ND4蛋白在细胞内的分布，需制备针对ND4蛋白的。
9. （5） 实验完成后，剩余细菌、使用过的培养基等均需经处理再统一废弃，原因是。