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  • 1. (2023高二下·思明期末) 透明颤菌血红蛋白基因vgb表达产物VHb蛋白能使其在低氧环境中生长良好。顶头孢霉是好氧性真菌,其发酵产物头孢菌素C有很大的市场需求量,但低氧环境影响其产量,传统发酵生产的增氧成本高。为提高产量科研人员将透明颤菌血红蛋白基因vgb基因和顶头孢霉pcpC启动子进行PCR拼接,并与质粒1构建重组质粒,如下图。

    注:hph是潮霉素抗性基因,Vgb基因与hph基因共用终止子。

    回答下列问题:

    1. (1) PCR过程需要设计引物,引物的作用是
    2. (2) 据图所示,重叠延伸PCR拼接时,若启动子启动方向与引物3延伸方向一致,引物2和引物3的5´端需分别添加序列。拼接形成重组基因的目的是
    3. (3) 利用含有的选择培养基筛选菌种,最后从个体生物学水平上鉴定,若,则表示转化成功。
    4. (4) 为验证转化成功的重组菌株遗传稳定性,可将菌株在( 含/不含)潮霉素的液体培养基中连续转接10代,取第10代菌液采用法接种到( 含/不含)潮霉素的固体培养基上,若能在固体培养基上生长,表明重组菌株遗传稳定性良好。

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