1. (2023高二下·台州期末) 糖尿病是全球患病率最高的慢性病之一，胰岛素是最主要的治疗药物，需求量非常大。研究者利用图中质粒构建重组DNA分子并导入大肠杆菌，获得生产胰岛素的工程菌．

注：EcoRI、BamHI、Smal为不同的限制酶，LacZ基因能编码产生β-半乳糖苷酶，可催化无色物质X-gal产生蓝色物质使菌落呈蓝色，否则为白色，以颜色不同为依据直接筛选含重组DNA分子菌体的方法称为“蓝白斑”法。

回答下列问题：

1. （1） 获取目的基因。提取胰岛β细胞中的总RNA，通过一定方法分离纯化出mRNA，经逆转录得到，然后设计引物利用PCR扩增胰岛素基因。选择胰岛β细胞提取RNA的原因是。
3. （2） 构建重组DNA分子。为使所得的胰岛素基因能按照正确的方向与载体连接，利用PCR扩增目的基因时，在目的基因的左右端分别添加限制酶的识别序列，且识别序列应添加在引物的（填“3”或“5"）端。
5. （3） 导入、筛选和鉴定。

   ①将大肠杆菌放在低温、低浓度的CaCl₂溶液中，使的通透性改变，成为感受态细胞，提高转化效率。

   ②“蓝白斑”法是基因工程中常用的筛选方法。为了达到筛选目的，根据所用载体质粒的遗传特性，受体大肠杆菌需具备敏感和缺陷等特征。筛选时，将转化后的菌液经稀释后用涂布分离法接种于含的培养基，经培养后挑取白色的单菌落，即为目标工程菌。

   ③为更加精准地鉴定受体细胞中是否转入目的基因，可采用和PCR等方法，PCR后可用凝胶电泳鉴定PCR产物。下列属于影响DNA迁移速率因素的是（A．DNA分子大小    B．DNA分子形状    C．所带电荷情况        D．凝胶浓度）

7. （4） 验证胰岛素功能。为验证胰岛素的降血糖功能，某生物小组以小鼠的活动状况为观测指标设计实验。

   实验材料：正常小鼠若干、注射器、胰岛素溶液、葡萄糖溶液、生理盐水等

   请完善实验步骤：

   ①给每只生理状况相似的正常小鼠，观察并记录小鼠的活动状况。

   ②等小鼠出现活动减少、甚至昏迷等症状，将小鼠随机均分为A、B两组。

   ③A组小鼠，B组小鼠，一段时间后，观察小鼠活动状况。

   结果及结论：A组小鼠症状得到缓解，B组小鼠状况无变化，证明胰岛素具降血糖功能。