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  • 1. (2023高二下·南岗期末) 某抗膜蛋白治疗性抗体药物研发过程中,需要表达N蛋白胞外段,制备相应的单克隆抗体,增加其对N蛋白胞外段特异性结合的能力。

    1. (1) N蛋白胞外段抗原制备,流程如图1

      ①构建重组慢病毒质粒时,选用氨苄青霉素抗性基因作为标记基因,目的是。用脂质体将重组慢病毒质粒与辅助质粒导入病毒包装细胞,质粒被包在脂质体(填“双分子层中”或“两层磷脂分子之间”)。

      ②质粒在包装细胞内组装出由蛋白质外壳和组成的慢病毒,用慢病毒感染海拉细胞进而表达并分离、纯化N蛋白胞外段。

    2. (2) N蛋白胞外段单克隆抗体制备,流程如图2

      ①用N蛋白胞外段作为抗原对小鼠进行免疫后,取小鼠脾组织用酶处理,制成细胞悬液,置于含有混合气体的中培养,离心收集小鼠的B淋巴细胞,与骨髓瘤细胞进行融合。

      ②用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选,获得杂交瘤细胞,将其接种到96孔板,进行培养。用技术检测每孔中的抗体,筛选既能产生N蛋白胞外段抗体,又能大量增殖的单克隆杂交瘤细胞株,经体外扩大培养,收集,提取单克隆抗体。

      ③利用N蛋白胞外段抗体与药物结合,形成,实现特异性治疗。

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