①从红景天细胞中提取总RNA为模板,进行RTPCR。其中PCR的反应条件:98℃10s,55℃30s,72℃1min,35个循环,其中55℃30s过程称为。若模板双链cDNA的数量为a个,经过35个循环需要消耗引物的数量是。
②为构建Cd转运蛋白与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白,需确保目的基因与质粒正确连接。构建重组质粒时用酶切PCR纯化产物(已添加相应酶切位点)及Ti质粒,然后通过DNA连接酶进行连接制备重组质粒,并依次转入大肠杆菌和农杆菌。
切割无菌苗将其茎段插入愈伤组织培养基,培养基应添加(填植物激素的名称),放入培养箱,经过21d的黑暗诱导,茎段经形成愈伤组织。
将农杆菌单克隆菌株对栾树愈伤组织进行侵染转化,并用添加的培养基筛选出转化成功的愈伤组织,将愈伤组织继续培养成完整植株。
①取4g筛选后愈伤组织,用镊子轻轻捣碎,冲洗。用滤网过滤溶液,将愈伤组织转移至含的酶解液中处理一段时间获得原生质体。
②在激光共聚焦下观测到细胞膜发出绿色荧光。在本研究中选择GFP与Cd转运蛋白构建融合蛋白的目的是。若要从个体生物学水平上进行目的基因的检测与鉴定,则可以检测比较转基因栾树与野生型栾树。