1. (2023高三上·浙江开学考) 绍兴故有“黄酒之乡”之称，黄酒是中国最古老的酒种，享有“酒中之祖、酒中之王”的美誉，深得大众喜爱。但研究发现黄酒中的潜在致癌物质——氨基甲酸乙酯（EC）的含量远高于其他酒。已知酒液中的EC主要由尿素和乙醇反应生成，而尿素主要由酵母菌代谢产生。

下图为酵母菌细胞中尿素的来源去路：

请回答：

1. （1） 降低黄酒中EC含量的关键是。
3. （2） 从基因角度分析，降低黄酒中EC含量的方法有：或增强DUR1，2基因的表达。
5. （3） 强启动子具有与结合，并多次启动过程的功能，将目的基因（DUR1，2基因）与强启动子结合可以增强目的基因的表达。

   ①要获取目的基因，可以从中钓取，获得的目的基因不含启动子，再进行扩增。

   ②下图为目的基因部分序列：

   

   应选择的一对引物是：

   A.5’-ATGACAGTTAGT-3’ B.5’-TACTGCCGGTGA-3’

   C.5’-TCACCGGCAGTA-3’ D.5’-ACTAACTGTCAT-3’

   

   ③如上图所示，构建基因表达载体时为避免反向拼接应选择识别切割质粒，再用连接。已知目的基因上无相关酶切位点，应在引物的（填“5’”或“3’”）端设计酶切序列，目的基因上游设计的酶切序列+引物序列为5’--3’。

   ④已知DUR1，2基因的转录模板链为A链，若DUR1，2基因反向连接，构建出反义DUR1，2基因，则其转录模板链为链。造成的结果是转反义DUR1，2基因酵母工程菌中内源的DUR1，2基因表达受阻，原因可能是。